生物化學與分子生物學蛋白質實驗技術蛋白質含量的測定 | 油脂營養成分查詢網
蛋白質含量測定法,是生物化學研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四種古老的經典方法,即定氮法,雙縮尿法(Biuret法)、Folin-酚試劑法(Lowry法)和 ...
蛋白質含量測定法,是生物化學研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四種古老的經典方法,即定氮法,雙縮尿法(Biuret法)、Folin-酚試劑法(Lowry法)和紫外吸收法。另外還有一種近十年才普遍使用起來的新的測定法,即考馬斯亮藍法(Bradford法)。其中Bradford法和Lowry法靈敏度最高,比紫外吸收法靈敏10~20倍,比Biuret法靈敏100倍以上。定氮法雖然比較複雜,但較準確,往往以定氮法測定的蛋白質作為其他方法的標準蛋白質。
值得注意的是,這後四種方法並不能在任何條件下適用於任何形式的蛋白質,因為一種蛋白質溶液用這四種方法測定,有可能得出四種不同的結果。每種測定法都不是完美無缺的,都有其優缺點。在選擇方法時應考慮:①實驗對測定所要求的靈敏度和精確度;②蛋白質的性質;③溶液中存在的干擾物質;④測定所要花費的時間。
考馬斯亮藍法(Bradford法),由於其突出的優點,正得到越來越廣泛的應用。
微量凱氏(Kjeldahl)定氮法 編輯[1]樣品與濃硫酸共熱。含氮有機物即分解產生氨(消化),氨又與硫酸作用,變成硫酸氨。經強鹼鹼化使之分解放出氨,借蒸汽將氨蒸至酸液中,根據此酸液被中和的程度可計算得樣品之氮含量。若以甘氨酸為例,其反應式如下:
CH2COOH
| + 3H2SO4 → 2CO2 + 3SO2 +4H2O +NH3 (1)
NH2
2NH3 + H2SO4 → (NH4)2SO4 ...
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